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SIGMA蛋白酶K的應(yīng)用

發(fā)布時(shí)間: 2017-06-26  點(diǎn)擊次數(shù): 3767次
SIGMA蛋白酶K采用基因突變技術(shù),對基因進(jìn)行定點(diǎn)突變后,將其重組到酵母染色體上,利用發(fā)酵技術(shù),通過誘導(dǎo)獲得高活性的重組SIGMA蛋白酶K,通過基因改造后,提高大大提高了酶的活性,SIGMA蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。
在pH4到pH12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解。此酶經(jīng)脫色和色譜純化去除了RNA和DNA,也檢測不到其它雜酶活性。
由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而它應(yīng)用很廣泛,主要用在基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶,也可以于提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質(zhì)的雜質(zhì)。
 
SIGMA蛋白酶K應(yīng)用
SIGMA蛋白酶K的應(yīng)用主要在實(shí)驗(yàn)室,在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛。
(1)尤其適用于DNA、RNA 提取過程中抑制核酸酶;
(2)用于原位雜交,處理組織碎片以保證的探針篩選;
(3)通過修飾細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和糖蛋白以確定蛋白質(zhì)在膜上的位置;
(4)準(zhǔn)備菌落轉(zhuǎn)移時(shí)除去細(xì)胞碎屑;
(5)通過激活細(xì)菌自溶因子促進(jìn)細(xì)胞溶解;
(6)為脈沖電場凝膠電泳、RT-PCR等準(zhǔn)備無DNase、RNase的樣品;
(7)有助于從組織中線粒體提取;
(8)傳染性海綿狀腦病的研究中用于分解腦組織樣品中的蛋白朊病毒;
(9)指紋印跡。
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