ECL化學發(fā)光底物 BL520A 現(xiàn)貨

ECL 化學發(fā)光底物

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格

BL520A ECL 化學發(fā)光底物 100 ml

產(chǎn)品簡介： West Pico ECL 超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶 HRP 的抗體 及其關聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico ECL 超敏發(fā)光液是目 前zui靈敏的商業(yè)化熒光 ECL 檢測試劑。

產(chǎn)品組份：

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格

BL520A-1 ECL 化學發(fā)光底物 A 液 50 ml

BL520A-2 ECL 化學發(fā)光底物 B 液 50ml

用途：用于 HRP 標記抗體的 Western Blot 和 HRP 標記探針的核酸雜交。

產(chǎn)品特點： 1、具有*靈敏度和高信噪比，可檢測 10～100 fg 抗原; 2、可在日光燈下進行發(fā)光操作; 3、發(fā)光迅速，熒光可使 X 光膠片感光達 12 小時以上，特別適用于痕量蛋白或核 酸檢測; 4、可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。

使用方法: 1、執(zhí)行常規(guī) SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和 Western Blot 步驟。注意用 HRP 標記 lgG 或用 一抗-鏈親和素-生物素-HRP 夾法。 2、Western Blot zui后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但 靈敏度略有降低。 3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光 工作液(0.125mL 發(fā)光工作液/cm2 膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育 3 分鐘， 準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發(fā) 光過程的本質(zhì)是酶促反應，使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶 曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。 4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5、打開 X 光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將 Western Blot 膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹 Western Blot 膜，去除氣泡和皺褶，可剪 去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋 Western Blot 膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。 6、暗房內(nèi)壓 X 光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。 安全性：無特殊毒性，按普通化學品處理。 注意事項： 1、步驟 1～5 可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略 有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2、長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光 不足則條帶模糊。 3、發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見， 低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使 X 光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察 判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使 X 光膠片感光，因而 弱帶可曝光 1-10 小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗， 然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。 4、由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗 1:1000～ 1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。 5、某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質(zhì)量保鮮膜。 6、使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定 膠片上條帶的位置和大小。 7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗體應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 保存條件： 4 oC 密封避光保存一年以上，短期可放置室溫。

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